甲型流感病毒核酸检测试剂盒的原理是通过扩增病毒基因组中的特定区域，将其转化为可以检测的数量级，并使用荧光探针或其他方法检测扩增产物的存在与否。具体来说，该测试剂盒通常使用聚合酶链式反应(PCR)技术，利用逆转录酶将病毒RNA转录成相应的DNA，在PCR过程中，使用特异性引物扩增目标DNA序列，并结合荧光探针进行实时荧光定量检测。如果样本中存在甲型流感病毒的DNA，则会产生荧光信号，证明样品呈阳性结果。

　　甲型流感病毒PCR核酸检测试剂盒索要详细说明书请联系客服

　　【试剂组成】

　　包装规格50T/盒

　　反应液500μL×2管

　　酶液50μL×1管

　　阳性质控品50μL×1管

　　阴性质控品250μL×1管

　　说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

　　【储存条件及有效期】

　　-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。

　　【适用仪器】

　　ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

　　【标本采集】

　　适用于人体的血液、体液和棉拭子等多种样本。

　　【保存和运输】

　　上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，

　　严禁反复冻融。

　　【使用方法】

　　1.样品处理(样本处理区)

　　1.1样本前处理

　　血液、体液和棉拭子样本取100μL于1.5mL灭菌离心管中。

　　1.2核酸提取

　　推荐采用上海研尊生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取，请按

　　照试剂说明书进行操作。

　　2.试剂配制(试剂准备区)

　　根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；反应管数

　　每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

　　试剂CB反应液酶液

　　用量(样本数为N)20μL 1μL

　　将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21μL/管。

　　3.加样(样本处理区)

　　将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短

　　暂离心。

　　4.PCR扩增(核酸扩增区)

　　4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

　　4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；

　　荧光通道选择：检测通道(Reporter Dye)FAM，淬灭通道(Quencher Dye)NONE，ABI系列仪器请勿选择

　　ROX参比荧光，选择None即可。

　　4.3推荐循环参数设置：

　　步骤循环数温度时间收集荧光信号

　　1 1 cycle 95℃10min否

　　2 40 cycles

　　94℃15sec否

　　55℃30sec是

　　5.结果分析判定

　　5.1结果分析条件设定

　　设置baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像

　　调节baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的

　　Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

　　5.2结果判断

　　阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

　　可疑：检测通道35值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35值≤38，且曲线有明显的增长曲线，

　　判定为阳性，否则为阴性；

　　阴性：样本检测结果Ct值>38或无Ct值。

　　6.质控标准

　　阴性质控品：Ct值>38或无Ct值；

　　阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；

　　以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

　　7.检测方法的局限性

　　1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

　　2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

　　3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

　　4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

　　5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

　　6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

　　7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

　　【注意事项】

　　1.所有操作严格按照说明书进行；

　　2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；

　　3.反应液应避光保存；

　　4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

　　5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

　　6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

　　7.实验完哔后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

　　8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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